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外泌体方法总结

1:超速(差速)离心法,2:密度梯度离心,3:超滤,4:免疫分离法,5:PEG-base沉淀法,6:尺寸排阻色谱,7:特殊磁珠试剂盒提取法。

外泌体方法总结

外泌体的提取方法
1:超速(差速)离心法:通过低速、高速离心交替进行,分离到大小相近的囊泡颗粒。虽然技术含量不高,但纯度较低。
2:密度梯度离心:在超速离心力作用下,使蔗糖溶液形成从低到高连续分布的密度阶层,通过密度梯度离心,样品中的外泌体在1.13-1.19g/ml的密度范围富集。虽外泌体纯度比差速离心高,但步骤繁琐,耗时。
3:超滤:根据外泌体的大小,从蛋白质和其他大分子中分离外泌体。但是用该方法过滤膜的粘附,可能会损失外泌体,并且过滤时的压力和剪切力,可能会使外泌体变形受损。
4:免疫分离法:通过抗体包被的微球,特异性结合外泌体。但是不适合从大量样本中获得外泌体。
5:PEG-base沉淀法:通常将样本与含聚合物的沉淀溶液混合,在4℃温育并低速离心。然而该方法可能会同时分离非囊泡污染物(如脂蛋白),同时聚合物材料的混杂可能会影响下游分析。
6:尺寸排阻色谱:填充多孔聚合物微球的柱子,分子根据其直径通过微球,半径小的分子需要更长的时间才能通过色谱柱的孔隙迁移,而大分子则从色谱柱中更早地洗脱。尺寸排阻色谱可以精确分离大小分子。但提取太耗时,不适合大量样本处理。
7:特殊磁珠试剂盒提取法:以磁珠为分离材料的外泌体提取试剂盒。在特定的缓冲体系中, 磁珠吸附外泌体,并被特定的洗脱液(或 PBS /ddH2O)洗脱下来,洗脱后的外泌体不含其它化合物,可直接用于动物体内注射。这是目前本人常用方法,省时间,纯度高,外泌体回收率达到 95%以上。

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